單細胞水平如何進行基因表達分析？
炎炎夏日，今天給大家介紹一款用于單細胞水平基因表達分析的神器。
基因表達 (gene expression) 是指細胞在生命過程中，把儲存在DNA中的遺傳信息經過轉錄和翻譯，轉變成具有生物活性的蛋白質分子（或RNA分子）。很多疾病的發(fā)生發(fā)展、很多藥物的作用機理、很多生物的代謝調控作用等都和基因表達的變化有關，因此對基因表達進行分析十分重要。由于基因表達是在單個細胞水平進行調控，所以需要用多種方法來分析單個細胞如干細胞、神經元、發(fā)育組織、激光捕獲切片的基因表達方式。
為了便于研究單細胞的基因表達，美國Signosis公司開發(fā)出一種基于SYBR Green的單細胞實時熒光定量RT-PCR檢測試劑，該試劑可以使用細胞裂解液直接檢測基因表達水平，無需RNA制備過程。
* SYBR Green是廣泛用于雙鏈DNA的特異性染料，常用作實時熒光定量PCR報告染料。
小編說了半天，下面正式Pick出今日介紹的主角：
|
貨號 |
產品名稱 |
規(guī)格 |
目錄價 |
品牌 |
|
CL-0003 |
單細胞實時熒光定量RT-PCR檢測試劑 |
10次 |
￥5,449 |
Signosis |
與其他定量試劑盒相比，Signosis的試劑盒原理是什么？不同之處？優(yōu)點是？
1）試劑盒包括cDNA合成和PCR擴增的所有試劑：
? 細胞裂解液（1mL）
? Oligo dT
? 隨機引物
? 反轉錄buffer預混液
? 反轉錄酶
? 對照引物
? SYBR Green PCR預混液
2）您只需要準備：目的基因特異性引物
3）不同之處在于：無需額外制備/提取細胞RNA
4）原理圖：
圖1 試劑盒原理：細胞裂解液裂解細胞后直接進行反轉錄及隨后的 PCR分析。
5）結果展示：
圖2 A: 比較Signosis與其他品牌的細胞裂解液。分別對裂解產物中的β-actin進行30個循環(huán)反轉錄PCR。
B: 基因組DNA污染檢測。Lane1：細胞裂解產物不經過反轉錄直接對β-actin進行36個循環(huán)PCR擴增；Lane2：細胞裂解液反轉錄獲得cDNA后對β-actin進行36個循環(huán)PCR擴增。
圖3 細胞裂解產物中檢測靶基因。
隨著HeLa細胞數的增加，分別用適量細胞裂解液裂解細胞后進行反轉錄，而后在7700 PCR儀上進行Actin、GAPDH和B2M基因的3復孔qPCR反應。
6）產品優(yōu)點：
? 一站式 — 試劑盒包含了從細胞裂解、反轉錄到PCR的所有試劑
? 無需RNA制備 — 細胞裂解產物可直接用于反轉錄
? 功能強大 — 該試劑可獲得全長的cDNA
? 實時監(jiān)控 — 整個分析過程可以實時監(jiān)控
7）FAQs：
a. 細胞裂解液能使用幾次？
每個試劑盒里包含1mL的細胞裂解液：
|
待裂解細胞數 |
細胞裂解液用量/次 |
使用次數 |
|
1000-10000 |
50ul |
20次 |
|
50-1000 |
20ul |
50次 |
|
1-50 |
5ul |
200次 |
b. 有沒有儀器要求？
兼容SYBR Green的PCR儀。
更多信息請點擊Signosis官網
www.signosisinc.com
Signosis（美國）：是一家專業(yè)的生物試劑產品供應商，致力于基于微孔板分析技術的生命科學研究產品的開發(fā)、生產和銷售。Signosis成立于2007年，公司專注于細胞因子、轉錄因子、miRNA及疾病標志物等重要調控因子和標志物的研究，基于自有專利技術，開發(fā)完成400多種先進而獨特的用于發(fā)現、篩選和分析的生命科學研究產品。
